Развитие эмбриона и биопсия

Углублённо

мтДНК в эмбрионе до имплантации

Ооцит передаёт эмбриону весь запас мтДНК. До стадии бластоцисты репликация мтДНК подавлена, поэтому при каждом клеточном делении имеющиеся мтДНК распределяются между дочерними клетками, а содержание мтДНК на клетку снижается примерно в два раза (Rubens et al., 2025). Возобновление репликации и регуляция копийности при дифференцировке клеточных линий тесно связаны с плюрипотентностью (Facucho-Oliveira & St John, 2009). Если бы молекулы распределялись крайне неравномерно, внутри эмбриона возникло бы собственное «бутылочное горлышко»; поэтому репрезентативность биопсии необходимо проверять экспериментально (Rubens et al., 2025).

Данные стадии дробления

• Monnot и соавт. исследовали 70 одиночных бластомеров эмбрионов двух носительниц m.3243A>G: максимальная разница между бластомерами одного эмбриона составила 6 п. п. при коэффициенте внутриклассовой корреляции 0,994; уровень в двух бластомерах 3-го дня отличался от уровня в целом эмбрионе 5-го дня у 13 из 16 эмбрионов — менее чем на 7 п. п., у трёх — на 10–15 п. п. (Monnot et al., 2011).
• Sallevelt и соавт. на 294 бластомерах 73 эмбрионов 9 носительниц m.3243A>G (граница 15%) нашли лишь один потенциально ложноотрицательный результат (0,34%) и ни одного ложноположительного; авторы рекомендовали протокол с одним бластомером, отметив, что биопсия двух бластомеров снижает частоту живорождений (Sallevelt et al., 2017a).
• Sallevelt и соавт. при m.14487T>C нашли расхождение между бластомерами 19,4 и 30,6 п. п. в 2 из 19 эмбрионов (Sallevelt et al., 2017b).
• Mertens и соавт. показали, что при нейтральных и редких вариантах мтДНК отдельные бластомеры 3-го дня уже различаются (ранний мозаицизм), а доля потенциально патогенных вариантов между 3-м и 5-м днём снижается (Mertens et al., 2022).
• Tajima и соавт. исследовали 3PN-эмбрионы пар без известного варианта: метод выявил 4–22% m.8993T>G, разброс между бластомерами составлял 2–11 п. п. — в пределах погрешности метода (от −5 до +6 п. п.); для оценки биологической неоднородности эти данные непригодны (Tajima et al., 2007).

Данные стадии бластоцисты

• Treff и соавт.: уровень в ТЭ предсказывал уровень в ВКМ (r² = 0,97) при m.3243A>G (Treff et al., 2012).
• Rubens и соавт.: 112 эмбрионов с патогенными вариантами и 28 контрольных; варианты распределялись равномерно между бластомерами на 4-й день и между частями бластоцисты, уровни оставались стабильными между дроблением и бластоцистой; однако в 1 из 8 контрольных эмбрионов одиночные клетки ТЭ существенно различались (Rubens et al., 2025).
• Tofilo и соавт.: шесть бластоцист носительницы m.14487T>C с бимодальным распределением; после размораживания и разделения на части значения в оставшейся ТЭ и ВКМ близко совпадали с исходным биоптатом (Tofilo et al., 2026).
• Hu и соавт.: бластоцисту с 17,8% m.3250T>C в биоптате разделили на 16 проб по 3–5 клеток; значения 14,7–21,9%, среднее 18,2% — малые пробы разбросаны шире, но их среднее совпало с биоптатом (Hu et al., 2026).
• Полногеномные подходы позволяют выполнять разные виды ПГТ, включая оценку мтДНК, на одном биоптате (Janssen et al., 2024).

Внутриэмбриональная изменчивость в количественном выражении

В разделе Согласованность внутри эмбриона собраны парные измерения в биоптате ТЭ, ВКМ и оставшейся ТЭ, а также пары бластомеров. Разброс внутри эмбриона, как правило, на порядок меньше межэмбрионального. Практическое следствие: расхождение в несколько процентных пунктов не меняет решения для эмбрионов с крайними значениями, но может перевести эмбрион через выбранную границу, если измеренный уровень лежит вблизи неё.

Ограничения методов микродиссекции эмбрионов

Клеточный материал выделяют после оттаивания, как правило — из эмбрионов, не подошедших для клинического применения. Остаточные клетки, клеточный дебрис и материал под блестящей оболочкой нельзя приравнивать к клеточным линиям, из которых формируются ткани плода; ВКМ бластоцисты ещё не равна эпибласту (Tofilo et al., 2026). Поэтому сопоставления «ТЭ — ВКМ» и «ТЭ — оставшаяся ТЭ» следует рассматривать раздельно, а выборки пока малы и неравномерно представляют варианты мтДНК.

Биопсия как вмешательство

Биопсия — инвазивная процедура, и её параметры (стадия, число клеток, способ вскрытия блестящей оболочки, культивирование и криоконсервация) определяет и валидирует конкретная клиника и лаборатория. Универсального протокола для ПГТ-мт нет; опубликованные рекомендации касаются минимального числа клеток ТЭ для надёжной оценки гетероплазмии (Rubens et al., 2025) и выбора между одним и двумя бластомерами (Sallevelt et al., 2017a).

Описание стадий и биопсии — образовательное. Оно не является лабораторным протоколом и не задаёт параметров биопсии.