Cómo se realiza PGT-mt

Avanzado

1. Identificar la variante patogénica del ADNmt en la familia

El punto de partida es un diagnóstico molecular establecido. La investigación diagnóstica comienza cada vez más con el análisis genómico de ADN de sangre y/o de orina, y se estudia músculo cuando es necesario (Mavraki et al., 2023). Para planificar PGT-mt se necesitan la descripción exacta de la variante, pruebas de su patogenicidad, los niveles de heteroplasmia en los tejidos accesibles de la portadora y los antecedentes familiares por línea materna. En el caso de una variante de significado incierto, la decisión de realizar PGT-mt requiere una justificación especial.

2. Asesoramiento y evaluación de las opciones reproductivas

Las opciones incluyen la concepción natural con diagnóstico prenatal, PGT-mt, ovocitos de donante, donación mitocondrial (transferencia de material nuclear, por ejemplo, el huso del ovocito o los pronúcleos del cigoto) donde esté permitida, y renunciar al vínculo genético (Smeets et al., 2023; Castelluccio et al., 2025; Steffann, 2025). En el programa de Newcastle, la elección entre PGT y donación mitocondrial se basó en la probabilidad prevista de obtener un embrión con heteroplasmia baja (Hyslop et al., 2025; McFarland et al., 2025; Pickett et al., 2019). Los modelos matemáticos pueden estimar los riesgos y las probabilidades de éxito antes de la estimulación ovárica (Ji et al., 2023). Los aspectos éticos de PGT-mt —riesgo residual, elección de un nivel aceptable de heteroplasmia y consentimiento informado— se tratan por separado (Bredenoord et al., 2009).

3. Obtención de ovocitos y embriones

Un ciclo de reproducción asistida comprende estimulación ovárica, aspiración folicular, fecundación —en los programas de PGT, generalmente mediante ICSI— y cultivo embrionario hasta el estadio de biopsia (Hyslop et al., 2025). La respuesta ovárica a la estimulación, los desenlaces y el seguimiento de portadoras se han descrito en una cohorte francesa (Mayeur et al., 2023). El número de embriones disponibles para el análisis es la principal limitación práctica.

4. Biopsia embrionaria

La biopsia se realiza durante la segmentación (un blastómero) o en la fase de blastocisto (varias células del TE); las ventajas y limitaciones de cada opción se explican en el capítulo 4. Con la biopsia de TE, los embriones suelen criopreservarse mientras se esperan los resultados y se transfieren después del calentamiento.

5. Preparación de la muestra y WGA

Una biopsia de unas pocas células contiene una cantidad inicial de ADN extremadamente pequeña. El análisis puede realizarse directamente en el lisado (amplificación dirigida de la región de la variante) o después de la amplificación del genoma completo, que proporciona material para varias pruebas, incluida PGT-A. La WGA puede sesgar las proporciones alélicas e introducir errores de fondo; por ello se validan por separado la linealidad, el límite de detección y el ruido tras la WGA (Spath et al., 2021; Xia et al., 2024; Hu et al., 2026).

6. Cuantificación de la heteroplasmia

PCR con análisis de restricción

la variante crea o elimina un sitio de restricción; las proporciones se estiman a partir de los productos de digestión. Se utilizó, por ejemplo, en una amplia serie de embriones de Francia (Rubens et al., 2025).

Pirosecuenciación

secuenciación cuantitativa de una región corta; presenta limitaciones cuando la proporción de la variante es muy baja (Mizuguchi et al., 2025; Hyslop et al., 2025).

ARMS-qPCR

PCR cuantitativa específica de alelo (Mitalipov et al., 2014).

PCR digital en gotas (ddPCR)

cuantificación del ADNmt con la variante y de tipo silvestre a partir del número de gotas positivas y negativas, con corrección estadística de la ocupación de las gotas; se utiliza para evaluar el ADNmt residual después de una transferencia nuclear (Tytgat et al., 2021).

Secuenciación dirigida de nueva generación (NGS)

secuenciación profunda de una región del ADNmt, compatible con PGT-A en la misma muestra (Spath et al., 2021; Tofilo et al., 2026).

Secuenciación del genoma completo

un único ensayo que evalúa las dianas de PGT-M, la aneuploidía y el ADNmt (Janssen et al., 2024; Xia et al., 2024).

Son enfoques alternativos, no etapas de un mismo procedimiento. Ningún método es «mejor» por sí mismo: la elección depende de la validación de un laboratorio concreto para una variante y un tipo de muestra específicos (Mavraki et al., 2023).

7. Control de calidad, límite de detección y exactitud analítica

El laboratorio debe demostrar la linealidad en todo el intervalo de 0–100 % mediante mezclas de composición conocida, establecer los límites de detección y cuantificación, evaluar la reproducibilidad mediante mediciones repetidas y utilizar controles positivos y negativos (Mavraki et al., 2023). En las muestras de pocas células son importantes el control de la contaminación y la pérdida alélica. «Variante no detectada» significa que el ensayo no detectó la variante en las condiciones de la prueba validada; no demuestra que el nivel real de heteroplasmia sea del 0 %.

8. Evaluación conjunta con PGT-A

Un nivel bajo de heteroplasmia no basta para que un embrión sea apto para la transferencia. En el estudio de Spath y colaboradores, la mitad de los embriones analizados (16 de 33) eran aneuploides (Spath et al., 2021); la tasa de aneuploidía aumenta con la edad de la mujer (Volodyaev et al., 2025). Se evaluó el uso clínico de la NGS para analizar simultáneamente el ADNmt y la aneuploidía (Spath et al., 2021) y se planteó como un objetivo importante para las pruebas clínicas (Hanson & Seli, 2021). La combinación cuantitativa de ambos criterios se muestra en la sección Modelo PGT-mt × PGT-A.

9. Interpretación y discusión de la transferencia

Los embriones se ordenan según la carga mutante; cuando no hay ninguno sin variante detectable, se considera el que presenta la menor carga disponible. El programa elige y justifica de antemano su valor de corte: en Newcastle, por ejemplo, se preferían para la transferencia los embriones con una heteroplasmia inferior al 30 % en un único blastómero del día 3 (Hyslop et al., 2025). La decisión se toma junto con la familia, teniendo en cuenta el riesgo residual (capítulo 6).

10. Diagnóstico prenatal y seguimiento posnatal

Después de la transferencia se recomienda comentar la posibilidad de un diagnóstico prenatal de confirmación (Rubens et al., 2025). Su interpretación depende de la variante patogénica estudiada, del tejido analizado (vellosidades coriales, amniocitos) y de la edad gestacional. Las vellosidades coriales son menos fiables por la heterogeneidad placentaria; el análisis de amniocitos es fiable a lo largo de la gestación (Steffann et al., 2021). Las mediciones posnatales deben indicar el tejido, la edad del niño y el método; de otro modo, no pueden compararse con el resultado de PGT-mt.

Esta descripción no es un procedimiento normalizado de trabajo clínico. No existen parámetros de biopsia, condiciones de laboratorio ni criterios de selección universales; cada elemento del recorrido se define mediante validación local y requisitos normativos.